lipo3000转染HepG2细胞

HepG2细胞一直是公认的比较难转染的细胞，一般都是采用电转。但我在invitrogen官网看到他们使用lipo3000竟然转染效率可以达到50-60%。出于好奇我也用lipo3000转然后，失败。
失败点主要基于2个，

答案：错误，此时细胞的培养环境改变，胞膜的渗透性改变，会加大转染难度。而使用opti后的细胞生长环境也发生了变化，会使细胞产生应激，加大转染难度。

答案：错误，过多最多造成浪费。

（1）最好使用24孔板进行转染，转染完成细胞长满可以传代，这样不会造成lipo浪费。
（2）lipo的用量在预实验时可以调整到说明书的最高与最低，最低看转染效率，最高看细胞耐受（死亡率）
（3）当使用opti稀释lipo，使用P3000稀释DNA时，不需要各自孵育5min，而且两者混合后最多孵育15min；
（4）转然后或者转染中的细胞使用无双抗的完全培养基；
（5）HepG2如果在转染时是80%左右，在转然后就会长满，影响转染效率，最好调整细胞密度为60%时转染。第二天再荧光显微镜下观察，看一下转染效率；

A:opti-DMEM 25ul+lipo1.5ul
B：opti 25ul+P3000 2ul+DNA 1ug
混合孵育12min，加入细胞中，细胞中含有无双抗培养基500ul；
6孔板：
A opti 125ul+lipo 7.5ul
B：opti-125ul+P3000 5ul+DNA 5ug
混合孵育12min，加入细胞中，细胞中含有无双抗培养基800ul；

13941415787：HepG2细胞表面带什么电荷?

訾临：答：负电，癌细胞表面一般是负电

13941415787：师姐,找到你太好了,我也是做SiRNA转染进HepG2细胞,有问题请教你。_百度...

訾临：答：lipo2000转染效率有点低，我用的RFectSP悬浮细胞小核酸转染试剂，转染阳性率大概75％。实验结果不错，你试试。

13941415787：lipo3000里面的p3000是什么作用

訾临：答：促进质粒DNA入核的。lipo3000里面的p3000作用是促进质粒DNA入核的，P3000试剂使用体积与DNA的量是有比例关系的，DNA的量有所调整的时候，P3000的用量也应该相应增减。lipo3000是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸DNA和RNA转染入真核细胞，具有低细胞毒性，对多种类型的细胞和培养板都具有高...

13941415787：hepg2是悬浮细胞还是贴壁细胞

訾临：答：贴壁贴壁贴壁

13941415787：Hep-2细胞的大小

訾临：答：这个细胞是贴壁细胞，贴壁后形态呈梭形，挺容易观察的。细胞的直径范围在10~100微米；如果你想要近似值可以查阅一下体积相近的细胞；如果要精确值，建议你在高倍镜下放一标尺，观察细胞。

13941415787：为什么用optimem培养基进行转染实验

訾临：答：1、无血清，不含大量蛋白组分，不干扰DNA与转染试剂形成复合物。2、optimem培养基有利于细胞恢复健康状态：其中使用了 HEPES 和碳酸氢钠进行缓冲，并添加次黄嘌呤、胸苷、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、痕量元素和生长因子。3、其他因素。【延伸回答】：无血清培养基Opti-MEM及用lipo2000或lipo3000转染质粒是否...

13941415787：转染时的细胞密度40-50%可以吗

訾临：答：HepG2用lipo2000在我们实验室做的转染效率很高的，可以到70－80％，不必担心。不需要用电转，磷酸钙法也可以有40－50％的 操作上主要注意：1，细胞铺板时的状态很重要，应该在铺板前尽量消化为单细胞悬液，trypsin＋EDTA充分吹打即可 2，转染前1天铺板，待转染时密度刚好达到80－90％，不能太低，...

13941415787：肝癌细胞HepG2传代时,怎样才能使细胞消化成单个细胞?

訾临：答：HEPG2我养过，没见长成多层啊？你是不是长得太多没分瓶啊？消化时细胞成团是因为细胞贴壁不牢，轻度消化就成片下来，看起来就成团了。解决办法一个是吹打用力点，二个换新培养瓶试试，让它贴牢点。另外，MTT要求的是均衡性，每孔细胞数要基本一致就行，并不需要完全单个分离。贴壁细胞想100%吹...

13941415787：DNA转染HepG2有没有什么技巧,哪家的转染试剂较好

訾临：答：最经典是 Invitrogen 的Lipofectamine 2000，但是太贵了。Healthgene的HG_TransGeneTM tranfection reagent，比较便宜，效果也不错。还有Roche的FuGENE 6 。

13941415787：293T细胞哪种转染试剂好

訾临：答：一、针对 siRNA 递送优化的常用转染试剂 市场上的一些生物试剂公司通过siRNA 递送的优化也达到较理想的转染效果。比如： Thermo Fisher的Dharmafect 1 ，主要优化 SMARTpool siRNA 来转染 HepG2 细胞。 还有YEASEN的INTERFERin® siRNA/miRNA体外转染试剂等可用来转染 Hela或RAW264.7 等细胞。二、...